来自 刑事法律 2019-10-17 12:36 的文章
当前位置: 天空与你同行 > 刑事法律 > 正文

兽用药残留酶联免疫试剂,鸡蛋中各个磺胺类药

发文单位:农业部

目 次前言.................................................................................. II1 范围................................................................................. 12 规范性引用文件....................................................................... 13 制样................................................................................. 14 测定方法............................................................................. 15 检测方法灵敏度、准确度、精密度....................................................... 3附录A (资料性附录) 磺胺类药物色谱图................................................. 4前 言为了规范我省畜禽产品鸡蛋的生产和销售过程,保障人民的身体健康,我国规定鸡蛋中磺胺类药物总量不超过0.1mg/kg。因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留量检测方法,对于畜禽产品的安全具有现实意义,我们在总结国内外相关检测方法的基础上,制订了用高效液相色谱法测定鸡蛋中磺胺类药物残留量的标准。本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制,GB/T 1.2-2000《标准化工作导则 第2部分:标准中规范性技术要素内容的确定方法》进行修改。本标准附录A是资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准发布。本标准起草单位:四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所。本标准主要起草人:谢青、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、吴晓岚王海波。鸡蛋中五种磺胺类药物残留量检测方法-高效液相色谱(HPLC)法1 范围本标准规定了鸡蛋中磺胺类药物残留量检测的制样和高效液相色谱(HPLC)测定方法。本标准适用于鸡蛋中磺胺类药物的残留量测定。定量限为20μg/Kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6682-1992分析实验室用水规则和试验方法3 制样3.1 样品的制备取适量新鲜或冷藏的空白和供试去壳全蛋,匀浆混合使之均匀、密封。3.2 样品的保存-20℃以下冰箱中贮存备用。4 测定方法4.1 方法提要或原理鸡蛋中的磺胺类药物用乙腈提取,正己烷脱脂,碱性氧化铝萃取柱净化,旋转蒸发仪蒸干。用高效液相色谱仪测定,外标法定量。4.2 试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.2.1 对照品:SMM,SM2,SMZ,SDM,SQ标准品:纯度≥99% SIGMA公司4.2.2 WATERS碱性氧化铝SPE柱(2g10 mL)或相当者4.2.3 乙腈 甲醇 色谱纯4.2.4 正己烷,正丙醇,冰乙酸,无水硫酸钠4.2.5 五种磺胺标准贮备溶液取五种磺胺标准品约10mg,精密称定,用甲醇溶解并稀释成浓度为100μg/mL的标准贮备液,置-20℃保存,保存期不超过一年。4.2.6 五种磺胺标准溶液 **准确量取五种磺胺标准贮备溶液适量,用流动相依次稀释成浓度为10、25、50、100、250 μg/L的标准溶液。置4℃冰箱中保存,保存期不超过一个月。4.3 仪器和设备4.3.1 高效液相色谱仪,配紫外检测器4.3.2 电子天平感量0.01g4.3.3 电子天平 感量0.00001g4.3.4 组织匀浆机4.3.5 漩涡混合仪4.3.6 振荡器4.3.7 冷冻离心机4.3.8 固相萃取装置4.3.9 旋转蒸发仪4.3.10 离心管50mL4.3.11 鸡心瓶50mL4.3.12 分液漏斗 100mL4.3.13 微孔滤膜0.45μm4.4 测定步骤4.4.1 试料的制备试料的制备包括:——取冷冻样品于室温解冻,将解冻后的样品作为供试样品。——取冷冻空白样品于室温解冻,将解冻后的空白样品作为空白样品。——取空白样品,添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加样品。4.4.2 提取称取供试样品5.0g(精确到0.05g)于离心管中,加入乙腈20mL,无水硫酸钠4g,在涡旋混合仪上混匀后并振荡10 min,3000r/min,离心5min,将上层液全部转入分液漏斗中,再加入乙睛10mL按上述步骤重复提取,合并两次上清液,加入正己烷15mL,混匀静止,取下层液体于鸡心瓶中,加入正丙醇5mL,于500C减压旋转蒸干,加95%的乙睛5mL于鸡心瓶中,充分涡旋溶解残留物,备用。4.4.3 净化用95%的乙睛5mL活化碱性氧化铝柱。取上述备用液,以每3~4秒1滴的流速通过预处理后的碱性氧化铝柱,再用95%的乙睛5mL洗涤鸡心瓶过柱,不收集。最后用70%的乙睛10mL洗脱并用鸡心瓶收集洗脱液,加入正丙醇5mL,于500C减压旋转蒸干,用流动相1mL溶解残余物,充分涡旋,用0.45μm滤膜过滤,滤液供高效液相色谱仪测定。4.4.4 标准曲线的制备将浓度为10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、250 μg/L的系列标准溶液,供高效液相色谱仪测定。4.4.5 测定4.4.5.1 液相色谱条件色谱仪:Waters 2695高效液相色谱仪(配紫外检测器)或相当者色谱柱:Waters SymmetryC18 (4.6mm×250mm,5μm) 或相当者柱温:30℃流速:1.0mL/min进样量:20μL流动相:乙腈-甲醇-水-乙酸(V/V 2+2+9+0.2)4.4.5.2 测定法积计算,即得。标准溶液及试样溶液中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液的色谱图见附录A中图A。4.4.6 空白试验除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5 结果计算和表述按下式计算试样中磺胺类药物的残留量:![](file:///C:/DOCUME~1/lenovo/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image001.gif)式中: *X***——试样中磺胺类药物的残留量(μg/kg);*A***——试样溶液中磺胺类药物的峰面积;*AS——标准溶液中磺胺类药物的峰面积;cs*——标准溶液中磺胺类药物的浓度(μg/L);V**——溶解残余物的体积(L);m——供试鸡蛋试样的质量 (kg)。注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。5 检测方法灵敏度、准确度、精密度5.1 灵敏度本方法在鸡蛋中的检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg。5.2 准确度本方法在鸡蛋中20μg/kg~100μg/kg添加浓度的回收率为70%~110%。5.3 精密度本方法的批内变异系数CV≤17%; 批间变异系数CV≤26%。****

文  号:农医发[2005]17号

发布日期:2005-6-23

执行日期:2005-6-23

生效日期:1900-1-1

各省、自治区、直辖市兽医(畜牧、农牧、农业)厅(局、办):

  根据《兽药管理条例》和《关于加强兽药残留检测试剂(盒)管理的通知》(农办医[2005] 3号),我部组织制定了《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案审查技术资料要求》和《兽药残留试剂(盒)备案参考评判标准》,现予发布,请各有关部门遵照执行。此前发布的兽药残留检测试剂(盒)备案技术资料要求与本通知不符的,以本通知为准。

  附件:1.兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案审查技术资料要求

     2.兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准

  二〇〇五年六月二十三日

  附件1:兽药残留酶联免疫试剂盒备案审查技术资料要求

  一、产品研制概况

  (一)立项依据和国内外研制概况

  (二)产品研制概况

  1、主要材料制备方法概述

  2、检测方法的建立

  3、样品提取方法的研究情况

  4、与理化方法的比较

  如无理化方法则选用代表性进口试剂盒比较

  (三)复核试验报告

  至少提供2个复核试验单位的报告。

  二、产品生产工艺

  1、生产过程

  2、工艺流程

  三、产品质量标准

  (一)质量标准

  1、物理性状描述

  2、灵敏度

  3、特异性

  阴性和具有参考意义浓度的阳性样品测定结果范围。

  4、精密度

  选用标准曲线50%抑制浓度(IC50)附近浓度的标准溶液重复测定。

  5、适用范围

  6、用法及结果判定

  7、注意事项

  8、贮藏条件和保质期

  9、规格

  (二)质量标准起草说明

  质量标准各项制定的依据。

  四、产品稳定性试验

  2~8℃放置,分别于0、1、2、3个月测定,以后可根据保存期,每隔3个月测定1次。

  推荐进行37℃加速和冻融的稳定性试验。

  测定项目为0标准液的OD值、IC50、代表浓度的添加回收率,直到测定值

  超过允许范围为止。

  五、使用说明书

  1、试验原理

  2、使用范围

  3、交叉反应

  4、使用单位需自备的设备及试剂

  5、提供的材料与试剂

  6、溶液的配制

  7、样品的前处理方法

  8、检测步骤

  9、结果判定

  10、检测方法灵敏度、准确度、精密度

  11、注意事项

  12、贮藏条件和保存期

  13、供应商名称、地址

  六、试剂盒的技术参数

  1、标准曲线

  2、检测限和定量限

  3、临界值

  4、精密度和准确度

  5、交叉反应

  附件2:

  试剂盒备案参考评判标准

  1、标准曲线

  定量方法:标准曲线至少由5个浓度组成,测定次数不少于5次,以确定工作浓度范围和IC50范围。

  定性方法:工作浓度范围通过阴性、临界值浓度和阳性的样品测定来确定,每个浓度重复不少于5次,浓度与响应值之间应有一定的关系。

  2、检测限和定量限

  检测限:20份空白样品测定均值加3倍标准差。

  定量限:应大于标准曲线中最低浓度点。对于定量方法,应对该浓度样品至少测定6次进行验证,而不能通过外延法推断。

  3、临界值(cut-off值)的确定

  对于有最高残留限量的药物,检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1.64倍标准差,即95%置信限处。

  对于禁用药物,检测方法的临界值为定量限,该值应达到公认的指标。

  4、精密度和准确度

  对于有最高残留限量的药物,添加浓度为MRL及MRL上下各一个浓度;对于禁用药物,添加浓度为定量限和2倍定量限,每个添加浓度至少测定5个平行样,并至少进行3批实验(不同检测日期,不同标准曲线,不同批次试剂盒)。

  (1)准确度:回收率范围大于40%或符合相应检测标准的要求。

  (2)精密度:以变异系数表示。

  批内变异系数:每批平行样之间的变异系数小于或等于25%,对于禁用药物小于或等于30%.

  批间变异系数:所有样品之间的变异系数值小于或等于30%,对于禁用药物小于或等于40%.

  定性方法:阴性和阳性样品各测定不少于50份,确定假阳性率和假阴性率。

  5、交叉反应

  试剂盒与待检药物类似物、代谢物或共同存在的药物测定交叉反应率。

  6、保存期

  保存期通过保存条件的稳定性试验结果确定。

  7、复核试验

  复核试验主要内容应包括:

  (1)定量方法:检测限、IC50以及至少两个添加浓度的准确度和精密度,并与理化方法(或与具代表性进口试剂盒)比较。

  (2)定性方法:检测限、假阳性率和假阴性率。

本文由天空与你同行发布于刑事法律,转载请注明出处:兽用药残留酶联免疫试剂,鸡蛋中各个磺胺类药

关键词: